Universidad de Colima
Facultad de Ciencias Químicas
Químico Farmacéutico Biólogo
Optativa: Bacteriología aplicada
Streptococcus
pneumoniae
Integrantes:
● Andrés Gómez Viridiana Monserrath
● Fonseca Ríos Samara Lizbeth 7°A
● Fuentes Maciel Diana Laura Lunes 19 de septiembre de
● Márquez Rodríguez Valeria Isabel 2022
● Sánchez Ceballos Melanie Sofía
Streptococcus pneumoniae
A B
● Diplococos grampositivos
● Inmóvil c
● Streptococcus α-hemolítico
● Causante de infecciones como
neumonías y sinusitis
● Resistente a la penicilina
Figura 1. Identificación de Streptococcus pneumoniae. A) S. pneumoniae en tinción de Gram, B) S.
pneumoniae en agar sangre, C) Técnica de recolección de muestra de esputo.
Importancia clínica.
Streptococcus pneumoniae continúa
siendo el principal agente bacteriano
causante de infecciones adquiridas
en la comunidad como otitis media,
neumonía, bacteriemia y meningitis,
alrededor del mundo. Este agente
además es de exigencia en su
cultivo. Por lo que dificulta su
aislamiento y conservación.
TINCIÓN DE GRAM
Al frotis directo coloreado con el gram
se observan cocos grampositivos
Figura 2. Tinción de gram de S. pneumoniae
asociados a leucocitos PMN.
CULTIVO
● Se siembra por agotamiento y se incuba en una atmósfera de CO2 al 5% de
18-24 horas.
Las colonias aisladas son:
● Lisas
● Pequeñas
● Redondas
● Mucoides
● Transparentes
● Brillantes.
● α-hemólisis
Figura 3. S. pneumoniae en agar sangre y chocolate
PRUEBA DE LAP
Prueba rápida que contribuye a la identificación y diferenciación de cocos
grampositivos catalasa negativa en base a la actividad leucinaminopeptidasa.
Diferencia los géneros Aerococcus y Leuconostoc de Streptococcus.
Los microorganismos que
contienen la enzima LAPasa
hidrolizan rápidamente el
sustrato de los discos y liberan
β-naftilamida, que reacciona
con el reactivo cinamaldehído
formando un compuesto
rosado-rojo.
Figura 4. Prueba de leucina amino peptidasa.
Prueba de susceptibilidad a la optoquina
● Tomar la colonia sospechosa α-hemolítica con un asa estéril y en una placa de agar
sangre y sembrar en línea recta.
● Coloque asépticamente un disco de optoquina o disco “P” con un diámetro de 6 mm y
5μg.
● Incubar las placas en una incubadora de CO 2 o en un frasco con la vela en extinción a
35°C durante 18–24 horas.
Cepa α-hemolíticas
con zona de Cepa α-hemolíticas
inhibición 9 mm–13 con zona de
mm* inhibición ≥14 mm
de diámetro
en diámetro*
= S. pneumoniae
Prueba de solubilidad en bilis
Figura 5. susceptibilidad a la optoquina
Prueba de solubilidad en bilis
● Tomar con una asa de la cepa y preparar una suspensión de células en 0,5 mL de
salina estéril.
● Dividir la suspensión en dos cantidades iguales. Añadir 0,25 mL de salina a uno de
los tubos y 0,25 mL de desoxicolato de sodio al 2% (sales biliares) al otro.
● Agitar los tubos suavemente e incubar a 35°C–37°C
durante 2 horas.
● Detectar lisis de las células en el tubo que contiene sales
biliares. Si el tubo se aclara o pierde turbidez,
el resultado es positivo.
Figura 6. solubilidad en bilis
Pruebas bioquímicas para la identificación de S.
pneumoniae
➔ Cocos
grampositivos en
parejas y cadenas
➔ Catalasa negativo
➔ Optoquina y
solubilidad en bilis
positivas
Figura 7. Identificación de Streptococcus pneumoniae
Pruebas serológicas
Confirmar un diagnóstico específico cuando el patógeno es difícil de detectar
por métodos directos
Muestra de suero
Fase aguda de la enfermedad Fase de convalecencia
Determinar IgM e IgA Anticuerpos IgG
Prueba de susceptibilidad a los antimicrobianos
Agar Müller-Hinton + 5% sangre carnero.
Método de difusión en disco, modificación de la técnica de Kirby-Bauer:
● Profundidad de la placa 3-4 mm.
● pH del medio 7.2-7.4
● inóculo de cultivo puro con una turbidez de
● aprox 0.5 en la escala de McFarland.
Figura 8. Medio Müller-Hinton adicionado con sangre de carnero
.
Suspensión colonias
Con un hisopo de Se inocula 3 veces
viables de un
algodón o dacrón toda la superficie en
crecimiento en A.
estériles: introducirlo la placa sin
sangre/chocolate
en la suspensión, se resuspender en el
equivalente a 0.5
elimina el excedente inóculo
McFarland
Incubar en posición Una vez seco el
Medir diámetro de invertida en inóculo (<15min),
cada zona de atmósfera de CO2 al colocar los discos de
inhibición (en mm) 5%, durante 20-24 antimicrobianos* con
hrs a 35°C pinzas estériles
Discos antimicrobianos
Disco Determina Nota
1 μg de oxacilina Susceptibilidad de los aislamientos a Si la inhibición es <20mm, se
penicilina (resistente/susceptible) realiza CIM
30 μg de Resistencia cloranfenicol
cloranfenicol
25 μg de Resistencia a cotrimoxazol El agar Mueller-Hinton, no debe
cotrimoxazol contener timidina si se ha de
obtener resultados exactos
Tabla 1. DIscos antimicrobianos a utilizar en una cepa identificada de S. pneumoniae
Tabla 2. Prueba de susceptibilidad a los microbianos de S. pneumoniae: puntos de corte y rangos para el control de calidad
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