VALIDACIN DE UN MTODO ANALTICO
Facultad de Estudios Superiores Zaragoza, UNAM. Mdulo de Desarrollo
Analitico, 8 semestre. Carrera de QFB. J.C Bonilla 66 y Calzada Ignacio
Zaragoza Colonia Ejrcito de Oriente, Mxico, DF. 09230
.
Preparacin de las disoluciones
a emplear
PREPARACION Completar hasta un volumen
DE UNA de 250 mL con agua destilada
DISOLUCIN 1N Transferir la cantidad pesada a y agitar hasta que se
DE NaOH un vaso de precipitados de 400 solubilice.
mL
Con ayuda de una balanza Aadir 100 ml de agua Almacenar en un envase de
granataria pesar 10 g de destilada libre de CO2 y polietileno de alta densidad
NaOH disolver completamente el debidamente etiquetado.
hidrxido de sodio.
Preparacin de NaOH 0.1N
Transferir la solucin a un Transferir a un vaso de
vaso de precipitados de 4 L precipitados de 250 mL
Almacenar en un envase
de plstico debidamente
etiquetado. Agregar agua destilada libre de CO2
hasta la marca de 100 mL y disolver
completamente el hidrxido
Llenar con agua destilada
libre de CO2 Hasta la marca
de 3.5 litros
En una balanza granataria pesar
14 g de NaOH.
Preparacin de la suspensin del m.o. y capa
siembra
Colocar 4 perlas de vidrio
estriles a cada tubo y Tomar 4 mL de la suspensin y
agitar con cuidado transferirla a un tubo de Ajustar transmitancia
durante 5 minutos. ensaye 132x100 mm con solucin salina
Agregar 3 mL de
solucin salina esteril
a cada tubo con Leer transmitancia en
Transferir el volumen de la
Micrococcus luteus espectrofotmetro a una Aplicar mismo ajuste de
suspensin a un matraz de 25
longitud de onda de 580 dilucin a la suspensin de M.
mL estril
nm. El resultado debe ser Luteus en matraz, con agua
una lectura de 25% 2%, en salina estril
caso de no ser as continuar
con el siguiente paso
Vaciar 4 mL de la capa
siembra sobre la capa
base en las cajas petri
Tomr 1.5 mL de la suspensin
y agregarlo en 100 mL de
Dejar solidificar
agar para capa siembra
Lectura en espectrofotmetro
Ajustar a cero de absorvancia con Repetir procedimiento con cada
blanco de NaOH 0.1N solucion
Ajustar a 280nm el
espectrofotometro
Llenar celda con solucin y tomar
absorvancia Realizar clculos
Nota: Realizar el procedimiento de la muestra de referencia (patente) para la muestra a analizar (genrico)
Preparacin de la prueba de potencia
microbiolgica
Adicionar en uno de los
pencilindros con jeringa de insulina
la dilucin 3 de ampicilina genrico
hasta el borde del penicilindro
Adicionar en el penicilindro frontal Adicionar en el penicilindro frontal
con jeringa de insulina la dilucin 4 con jeringa de insulina la dilucin 3
de ampicilina patente hasta el de ampicilina patente hasta el Colocar con las pinzas de diseccin en las
borde del penicilindro borde del penilindro placas que contienen la capa base y la
capa siembra 4 penicilindros en forma
paralela uniformente distribuidos y a 1
cm de la circunferencia del borde.
Adicionar en el penicilindro lateral
con jeringa de insulina la dilucin 4
de ampicilina genrico hasta el
borde del penicilindro
Tomar lectura de los halos de
inhibicin con un vernier.
Incubar las placas a 30-35 C
durante un periodo de 16-18
horas Interpretar los resultados
