Universidad Rafael Landívar

Facultad de Ciencias Ambientales y Agrícolas

Laboratorio de Bioquímica
Gerson Josué Lémus Díaz, Carné: 1174622
María de los Angeles Garcia Alegría, Carné: 2002723
Justine Naomi Velásquez Gómez, Carné: 1003219
Fecha: 04/10/2023

PRÁCTICA #5
Proteínas II: Determinación cualitativa de las proteínas

1. OBJETIVOS

• Conocer métodos para la identificación cualitativa de proteínas.

• Identificar las soluciones con resultados positivos o negativos durante la
ejecución de las reacciones con diferentes reactivos.

2. ANTECEDENTES
2.1 Análisis Cualitativo de las Proteínas

Las proteínas son polímeros compuestos de aminoácidos. Se pueden encontrar

20 aminoácidos en la naturaleza y sus diversas combinaciones generan la gran cantidad
de proteínas que se pueden encontrar en los distintos tejidos de los seres vivos. Las
propiedades físicas y químicas de las proteínas dependen de diversos factores como los
aminoácidos constituyentes, la interacción de los diversos enlaces entre los
aminoácidos, interacción entre estructuras proteicas y la relación entre varias proteínas,
lo que genera la actividad biológica propia de las proteínas (Química, 2019).

2.2 Prueba de Biuret

El Biuret es un reactivo que se emplea para la determinación de proteínas de

cadena larga y de cadena corta. Es especialmente utilizado en el área de química
analítica y uroanálisis para investigar la concentración de proteínas totales en suero,
plasma y orina. La prueba de Biuret se fundamenta en detectar los enlaces peptídicos.
La prueba se da en medio alcalino. La muestra debe contener al menos dos enlaces
peptídicos para que se pueda formar un complejo de color violeta-púrpura. El complejo
se forma por la unión de los enlaces y el ión de cobre (Gil, 2019).

Según Martin Gil (2019), El reactivo de Biuret está compuesto por hidróxido de
potasio, sulfato cúprico y tartrato de sodio y de potasio. El hidróxido de sodio se utiliza
para alcalinizar el medio, ya que esta condición es indispensable para que se dé la
reacción.

Si en la muestra se encuentran sustancias que posean enlaces peptídicos

(polipéptidos o proteínas) la prueba dará positiva. Una reacción se interpreta como
positiva cuando la solución se torna de color violeta. El color se produce por la
formación de un complejo entre al menos dos enlaces peptídicos que poseen el grupo
CO-NH y los cationes cúpricos (Gil, 2019).

2.3 Prueba de Millón

 La prueba de Millon es una prueba analítica utilizada para la detección del
aminoácido tirosina, que es el único aminoácido que contiene el grupo fenol. Como
muchas proteínas se componen de tirosina, la prueba es útil para la detección de dichas
proteínas. La prueba fue descubierta y nombrada en honor al químico francés Auguste
Nicolas Eugene Millón (Passen, 2016).

La prueba de Millon se basa en el principio de nitrificación del grupo fenol en la

tirosina, que luego forma complejos con metales pesados como el mercurio. El reactivo
utilizado para la prueba se llama reactivo de Millon y consiste en nitrato de mercurio y
nitrato de mercurio que se disuelve en ácido nítrico concentrado. En la prueba, el grupo
fenol de la molécula de tirosina es nitrado por el ácido nítrico presente en el reactivo. La
tirosina nitrada luego se combina con los iones de mercurio en la solución para formar
un precipitado o solución de color rojo (Passen, 2016).

• La prueba de Millon se utiliza para la detección de proteínas que contienen

tirosina en una muestra determinada.
• La prueba también ayuda a diferenciar la tirosina de otros aminoácidos.
• La prueba es útil en la detección de la proteína caseína y la proteína que se
encuentra en la carne cruda (Passen, 2016).

2.4 Prueba de Hopkin’s Cole

Es una prueba específica utilizada para la detección de indol.anillo y, por tanto,

triptófano en proteínas. a prueba fue descubierta por Frederick Gowland Hopkins y
Sydney W. Cole en 1901 como parte de su trabajo sobre el descubrimiento del
triptófano. fue criticada por Rosenheim, quien argumentó que el ácido glioxílico
utilizado en la prueba podría descomponerse fácilmente en formaldehído y dióxido de
carbono a altas temperaturas. Rosenheim descubrió el uso de formaldehído para detectar
triptófano. La prueba de Hopkin’s Cole es una de las reacciones de color utilizadas para
la detección de aminoácidos o proteínas particulares sobre la base de la formación de un
color específico (Gil, 2018).

La prueba se basa en el principio de que la capa de ácido sulfúrico concentrado

sobre una mezcla de proteínas que contienen triptófano con el reactivo de Hopkin’s
Cole da como resultado la formación de un anillo violeta en la interfaz. El ácido
glioxílico agregado a la muestra combina dos moléculas de triptófano actuando sobre el
anillo de indol de las moléculas de triptófano. El producto de condensación así formado
se deshidrata para formar un pigmento de color violeta. El color desarrollado en la
prueba se debe al grupo indol de la molécula de triptófano, que se convierte en un
compuesto coloreado por oxidación provocada por el grupo aldehído del ácido
glioxílico (Gil, 2018).
 3. DIAGRAMA DE FLUJO
A continuación, se presenta el diagrama de flujo del proceso de la práctica cinco:

Reacción de Biuret.

Inicio.

Identificar dos tubos de ensayo diferentes y

agregar: cristales de urea y 3 ml de
solución de clara de huevo al 5%.

Fundir cuidadosamente los cristales de

urea, poniendo el tubo de ensayo sobre la
llama del mechero.

Enfriar y disolver con 3 ml de agua

destilada.

Agregar gota a gota a ambos tubos de

ensayo de la solución de CuSo₄ al 1% y
agitar hasta producir un color violeta o
púrpura.

Observar y anotar los resultados obtenidos.

Fin.

Reacción de Millón.

Inicio.
Reacción aldehídica para el triptófano

Inicio.
 4. DATOS, CÁLCULOS Y RESULTADOS
A continuación, se presentan los resultados obtenidos en la práctica experimental:

Tabla 1
Datos obtenidos de la identificación cualitativa de proteínas

IDENTIFICACIÓN DE
REACTIVO SUSTANCIA REACCIÓN
PROTEÍNAS
Biuret Cristales de urea Color lila Enlaces peptídicos/Positivo

Biuret Clara de huevo Color morado Enlaces peptídicos/Positivo

Millón Clara de huevo Precipitado blanco Tirosina/Negativo

Triptófano Clara de huevo Color transparente Triptófano/Negativo

5. DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Se realizó diversas pruebas cualitativas para la identificación de proteínas

presentes en una sustancia. Estas pruebas solo permiten identificar si una muestra
contiene proteínas o no, pero no permite cuantificar la cantidad de proteínas presentes.

Utilizando la reacción de Biuret, se identificó la presencia de enlaces peptídicos

en la muestra de cristales de urea y en la clara de huevo, con una menor presencia de
estos enlaces en los cristales de urea debido a una menor coloración presente a
comparación de la muestra de clara de huevo, con una mayor coloración de color
morada. La reacción de Biuret es una prueba química basada en la interacción de los
grupos amino presentes en las proteínas con el reactivo de Biuret, compuesto por sulfato
de cobre. Al reaccionar los grupos amino con el sulfato de cobre se forma un complejo
formado entre los grupos amino y los iones de cobre, el cual da lugar a un cambio de
color en la solución, el cual puede presentar un color azul, violeta o rosado,
dependiendo de la concentración de proteínas en la muestra, como en el caso de la clara
de huevo. En el caso de los cristales de urea, al mezclar la urea con el reactivo de Biuret
esta se descompone, formando biuretina, la cual a su vez reaccionan los grupos amino
de la biuretina con los iones de cobre del reactivo, produciendo el cambio de color. El
reactivo de Biuret no es específico para una proteína en particular, dado que detecta la
presencia de proteínas en general y de compuestos relacionados.

Utilizando la reacción de Millón se obtuvo un precipitado blanco utilizando una

muestra de clara de huevo, por lo que no presentó coloración roja, indicando que es una
muestra negativa ante la presencia de la proteína tirosina. La reacción de Millón es una
prueba química que detecta la presencia del grupo funcional fenol en compuestos
orgánicos. Esta reacción forma un complejo de color rojo intenso cuando los grupos
fenol presentes una muestra reaccionan con el reactivo de Millón. En el caso de las
claras de huevo, estas no son naturalmente ricas en compuestos fenólicos, sino
contienen principalmente proteínas, agua y otros compuestos menores, por lo que no se
identificó la presencia del compuesto tirosina en la muestra.

Utilizando la reacción aldehídica para el triptófano, también conocida como

reacción de Hopkins-Cole, se obtuvo una muestra de color transparente sin ningún
 cambio, indicando una reacción negativa ante la presencia de triptófano en la muestra de
clara de huevo. Esta reacción aldehídica del triptófano permite identificar la presencia
del aminoácido triptófano presente en las proteínas, primero por medio de la oxidación
de los grupos amino en el triptófano por medio de la reacción con el ácido nítrico,
formando compuestos con grupos funcionales aldehídicos, luego estos reaccionan con el
hidróxido de sodio, formando un anillo de coloración morada debido a la formación de
nitro derivado del benceno. El triptófano al ser un aminoácido que se encuentra en
muchas proteínas también se encuentra presente en las claras de huevo. En la práctica
no se obtuvo ninguna reacción, esto se puede deber a que en la muestra no se tenía una
muestra significativa de triptófano, por lo que no se apreció un cambio en la solución.
Entre otro factor se puede mencionar la falta de una mayor cantidad de reactivo o no
esperar el tiempo suficiente para que se enfríe la muestra al agregar el hidróxido de
sodio, afectando la reacción.

6. CUESTIONARIO
1. Indique las proteínas que posee la clara del huevo

Las proteínas que posee la clara de huevo se encuentran entre no esenciales y

esenciales:
• Esenciales:
Treonina, Triptófano, Isoleucina, Leucina, Lisina, Metionina, Fenilalanina, V
alina, Histidina.

• No esenciales:
Alanina, Arginina, Ácido aspártico, Cisteína, Ácido glutámico, Glicina, Prolina,
Serina, Tirosina (Cruz, 2023).

2. Escriba las reacciones que ocurrieron durante la práctica

Reacción de Millón:

Reacción de Biuret:
Reacción aldehídica del triptófano:

3. ¿Qué métodos cuantitativos existen para determinar proteínas?

1. Ensayo de Bradford o Azul Coomasie

2. Ensayo de Lowry
3. Ácido Bicinconínico
4. Método Biuret
5. Absorción Ultravioleta (Abytek, 2023)

7. CONCLUSIONES
• La reacción de Biuret permite identificar la presencia de enlaces peptídicos presentes en
una muestra por medio del análisis cualitativo del cambio de color a morado, variando su
intensidad de color según la concentración de proteínas presentes.

• La reacción de Millón permite identificar la presencia de compuestos fenólicos presentes

en una sustancia, por medio del análisis visual cambiando su coloración a rojo para una
muestra positiva, identificando la presencia de la proteína tirosina.

• La reacción de Hopkins-Cole permite identificar la presencia del aminoácido triptófano

presente en las proteínas, por medio de la formación de un anillo morado indicando una
muestra positiva.

8. BIBLIOGRAFÍA
• (2019-03-13). Análisis cualitativo de proteínas. Recuperado de
https://quimicafacil.net/manual-de-laboratorio/analisis-cualitativo-de-proteinas/

• Abyntek. (2023, 2 de enero). 5 métodos para cuantificar proteínas - Abyntek

Biopharma. Abyntek Biopharma. https://www.abyntek.com/5-metodos-para-
cuantificar-proteinas/

• Cruz, R. (2023, enero). Bioquímica nutricional de la clara de huevo de gallina -

IIDENUT. IIDENUT. https://www.iidenut.org/instituto/2022/01/23/bioquimica-
nutricional-de-la-clara-de-huevo-de-
gallina/#:~:text=Los%20mayores%20alergenos%20en%20la,,%20lisozima,%20o
vomucina%20y%20ovotransferrina.

• Gil, M. (2019, 3 de julio). Biuret: fundamento, reactivos, procedimiento, usos.

Lifeder. https://www.lifeder.com/biuret/

• Gil, M. (2018). Prueba de Hopkin's Cole: definición, principio, procedimiento,

resultado, usos -. Microbiio.info – Articulos de Salud, Enfermedades, Síntomas y
Tratamientos. https://microbiio.info/prueba-de-hopkins-cole/

• Passen, M. (2016). Prueba de Millon: definición, principio, procedimiento,

resultado, usos -. Microbiio.info – Articulos de Salud, Enfermedades, Síntomas y
Tratamientos. https://microbiio.info/prueba-de-millon/

9. ANEXOS
 Anexo 1, Determinación cualitativa de las Proteínas.

Tubos de ensayo con urea

Fundición de los cristales de fundida con agua y Resultados de la prueba de
urea. solución de clara de Biuret.
huevo al 5%.
Fuente: Datos experimentales, TEC Universidad Rafael Landívar.

Anexo 2, Determinación cualitativa de las Proteínas.

Precipitado blanquecino de Resultado de la prueba de

la prueba de Millón. reacción aldehídica para Resultados juntos de las
el triptófano. pruebas realizadas.
Fuente: Datos experimentales, TEC Universidad Rafael Landívar.