HOMOGENIZACION Y CENTRIFUGACION.
HOMOGENIZACION.
Se refiere al rompimiento y disgregación de la célula o el tejido del cual se pretende
extraer el organelo o la molécula de interés biológico, buscando afectar la membrana
plasmática lo menos posible.
Homogenizadores Funcionamiento Tipo de Imagen
mecánicos tejidos
Mortero Se utiliza para disgregar Tejidos duros
sustancias, mediante la (vegetales).
presión ejercida, suelen ser de
porcelana. La técnica consiste
en presionar con la mano del
mortero, sobre una de las
paredes del mismo, a una
pequeña cantidad del material
a triturar
Potter Se utiliza para la reducción Tejido blando
controlada del tamaño de (cerebro e
partícula, especialmente hígado).
material biológico blanco, las
fuerzas de cizallamiento
generadas por el movimiento
de rotación del émbolo en un
tubo de presión provoca la
reducción del tamaño,
dándoles un trato suave y
moderadamente fuerte a las
muestras; los factores
determinantes son el espacio
entre la cabeza del mortero y
el tubo, la velocidad de
rotación y la viscosidad del
medio. Así pues, para los
tejidos blandos les
proporciona una efectividad en
la conservación de las
distintas y específicas
propiedades de dichas
muestras biológicas.
Virtis Se utiliza para tejidos Tejido
semiduros, ya que tienden a semiduros
ser muy elásticos y resistentes (corazón de
a la vez ,y es por esta pollo,
propiedad que es muy difícil músculo de
homogeneizarlos con el res).
empleo del mortero o Potter.
Consiste esencialmente de
aspas que giran a una
velocidad constante haciendo
que el trituramiento de la
muestra se haga de manera
uniforme, que brinda fuerzas
efectivas de corte para este
tipo de tejidos semiduros, así
también ayudando en algunos
casos a la conservación
intacta de las propiedades de
las muestras.
CENTRIFUGACION
La centrifugación es un proceso de separación que utiliza la acción de la fuerza
centrífuga para promover la aceleración de partículas en una mezcla de sólido-
líquido. Dos fases claramente distintas se forman en el recipiente durante la
centrifugación. Los centrifugadores se encargan de la separación de las partículas
mediante fuerza de aceleración gravitacional que se logra gracias a una rotación
rápida. Este proceso puede provocar la sedimentación o suspensión de las
partículas llamado sobrenadante.
FACTORES QUE INFLUYEN EN LA SEPARACIÓN DE LAS MUESTRAS POR
CENTRIFUGACIÓN
Dentro de la centrifugación también hay que tomar en cuenta los parámetros
físicos, ya que separa aumentando la fuerza gravitacional en base a;
peso
densidad
tamaño de los componentes.
También tenemos que tomar en cuenta lo siguiente:
Tiempo de centrifugación
Velocidad de centrifugación
ph y temperatura del medio de centrifugado
UNIDADES G Y COMO SE CONVIERTEN A RPM
La fuerza centrífuga relativa o fuerza g (RCF) es la cantidad de aceleración que se
aplicará a la muestra. Depende de las revoluciones por minuto (rpm) y del radio del rotor.
Mida el radio del rotor de su centrifuga
Sustituya r en la fórmula para calcular las RCF o rpm
Fuerza g (RCF) = (rpm)2 × 1.118 × 10-5 × r RPM = √[RCF/(r × 1.118)] × 1 × 105
Donde:
g = Fuerza centrífuga relativa
r = Radio del rotor (cm)
rpm = Revoluciones por minuto
