UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS ORIENTALES

FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS E INGENIERIA

LABORATORIO DE BIOLOGÍA

PRACTICA No. 1
MICROSCOPIA I

GLORIA VICTORIA CASTRO ROJAS*

MARTHA LUCIA ORTIZ MORENO*
ELIZABETH AYA BAQUERO*
HERNANDO RAMIREZ GIL*

PRELABORATORIO

1. ¿Qué es un microscopio?
2. Describa el uso de las partes mecánicas y ópticas del microscopio óptico.
3. ¿Cuáles son las clases de microscopios y para qué sirven?

OBJETIVOS

 Conocer e identificar las partes del microscopio óptico

 Conocer los cuidados del microscopio para su buen manejo
 Realizar un montaje húmedo para ser observado al microscopio

INTRODUCCION

A fines del siglo XVI el holandés Zacharias Hanssen, construyó el primer microscopio, lo
que llevó al hombre a sondear el mundo de lo infinitamente pequeño. Más tarde
Leeuwenhock mejoró considerablemente la técnica del pulido de los lentes, lo que le
permitió describir protozoos y bacterias.

Los microscopios ópticos surgieron al principio del siglo XX y hacia mediados de este llegó
el microscopio electrónico ampliando el poder de observación visual. El ojo humano posee
una resolución de más o menos 0.1mm (l micrómetro = 0.001mm), lo que implica que dos
puntos que están a menos de l00 micrómetros de distancia se ven como un solo punto. La
mayoría de las células eucarióticas miden de 3 a l0 veces menos que el poder de
resolución del ojo humano y las células procarióticas son más pequeñas todavía (Tabla 1).

Para identificar las estructuras celulares tenemos que apelar a instrumentos con una
resolución mayor como son: El microscopio óptico, el microscopio electrónico de
transmisión o de barrido.
 TABLA 1. Algunas unidades de uso frecuente en microscopia.

METRO MILIMETRO MICROMETRO Nanómetro Angström

(m) (mm) (µm) (nm) (Å)
1 1 x 103 1 x 106 1 x 109 1 x 1010
0.001 1 1000 1’000.000 1 x 107
0.000001 0.001 1 1000 1 x 104
1 x 10 -9 1 x 10 -6 0.001 1 10
1 x 10 -10 1 x 10 -7 1 x 10 -4 0.1 1

Actualmente el microscopio electrónico permite un aumento de unas 100 veces, es decir

de micrómetros a nanómetros (1 nanómetro = 0.000001mm = 10 Angstrom), permitiendo
un salto de la anatomía microscópica a la ultramicroscópica, de la anatomía de la célula a
las partículas sub-celulares.

Los mejores microscopios ópticos tienen un poder de resolución de 0,2 micrómetros, es

decir 200 nanómetros, de modo que mejoran la visión simple unas 500 veces. Con el
microscopio óptico se distinguen las estructuras más grandes de las células eucarióticas y
también células procarióticas individuales.

CARACTERISTICAS DEL MICROSCOPIO OPTICO

El microscopio compuesto está constituido por dos sistemas ópticos. Uno es el objetivo,
constituido por una lente (o sistema de lentes) dispuestos del lado que se sitúa el objeto.
El otro es el ocular, constituido por una lente (o sistema de lentes) colocado del lado por
donde se mira. Los ejes ópticos del objetivo y del ocular son coincidentes. La finalidad del
objetivo es siempre producir del objeto una primera imagen en ciertas condiciones de
proximidad o tamaño. Esta imagen funciona como objeto frente al ocular que da la
imagen definitiva observada. El microscopio compuesto es un instrumento destinado a
dar una imagen virtual y amplificada de un objeto pequeño.
El objetivo está constituido por una lente convergente de corta distancia focal (mm) y el
ocular es también una lente convergente pero de distancia focal algo mayor (2 cm.). La
distancia entre el objetivo y el ocular es de unos l5 a 20 cm. y es fija en casi todos los
microscopios.

La distancia de trabajo o DISTANCIA FRONTAL de un objetivo es el espacio que existe entre

la superficie de la lente del objetivo y la lámina cubre-objeto, una vez se encuentre
enfocada la preparación. A mayor aumento del objetivo, la distancia de trabajo disminuye
y se requiere una mayor intensidad de luz.
Los objetivos en ningún momento deben tocar la preparación, ya que se puede romper la
lámina, dañar el objetivo, o estropear el microscopio.

PODER DE RESOLUCION

El poder de resolución se refiere a la capacidad de un sistema óptico de presentar dos

puntos próximos distintos o separados. Se especifica por la distancia mínima en que se
logra resolver estos dos puntos. Este depende a su vez de la longitud de onda () y la
apertura numérica del objetivo (NA); en la mayoría de microscopios ópticos la longitud de
onda generada por sus bombillos es de 600nm aproximadamente. El poder de resolución
está dado por la expresión:

Poder de resolución = ____________

2 X NA

La apertura numérica está limitada a algo menos de 900, pues esto pondría a la lente y al
objeto en contacto. En microscopios buenos en realidad es de unos 85 0. Sin embargo
mientras esta resolución permite visualizar una considerable cantidad de detalles en la
mayoría de las células (con diámetro de 10 a 20micrómetros), muchas estructuras aún no
son observables; por ejemplo los ribosomas y las fibras de cromatina no condensadas del
núcleo, miden alrededor de 0.02micrómetros de diámetro.

PODER DE AUMENTO

Es la capacidad que presenta un instrumento óptico de aumentar en forma aparente, el

tamaño real de un objeto dado. En el caso del microscopio es la capacidad que posee éste
de presentar aumentados los objetos que se observan en él.

En óptica se acostumbra a designar con una X el valor del aumento. Así cuando se hace
referencia al objetivo u ocular X, se quiere decir que si se observara un objeto con una de
estas lentes independientemente del sistema óptico total, la imagen de este objeto
aparecerá 10 veces mayor. El poder de aumento total (AT) de un microscopio compuesto,
está dado por el producto de los poderes de aumento del objetivo (Aob) y del ocular (Aoc)
utilizados.

Ejemplo: Si observamos una estructura con un objetivo de 40X y un ocular de 10X, el

aumento total sería:

AT = Aob . Aoc

AT = 40x . 10x = 400x

PODER DE DEFINICION

Permite formar imágenes claras con contornos definidos.

PODER DE PROFUNDIDAD

Permite observar varios planos de la imagen con un mismo enfoque.

CARACTERISTICAS DEL ESTEREOSCOPIO

El estereoscopio está provisto de dos oculares y dos objetivos, lo cual da como resultado
una imagen tridimensional durante la observación.

Los oculares proporcionan aumento entre 6.3 y 25X. Los objetivos están compuestos
también por lentes de diferentes aumentos 0.63 – 4.0 X que están en el interior y
acoplados al botón de magnificación. Este último es el botón que permite el cambio
rápido de los lentes seleccionando los de aumento más apropiado.

PROCEDIMIENTO

COMO ENFOCAR AL MICROSCOPIO

 Proceda a conectar el microscopio a la toma eléctrica

 Accione el revólver de tal forma que el objetivo de menor aumento quede en posición
perpendicular con relación a la placa.
 Verifique que la luz esté pasando a través del condensador, observando si la parte
superior de dicho sistema aparece iluminada cuando se mira a través del orificio de la
platina, si esto no ocurre accione el diafragma de tal manera que se obtenga la
iluminación deseada (no olvide graduar la cantidad de luz apropiada, recuerde que el
condensador, el diafragma y la fuente de luz cumplen papeles importantes en la
regulación de estas).
 Coloque el micropreparado, sobre la platina y fíjela usando los dispositivos que para
tal efecto posee el microscopio. La lámina porta-objetos que desea observar no debe
estar húmeda por debajo. Mueva la placa hasta que la preparación a observar quede
localizada en el centro del orificio de la platina.
 Baje el lente del objetivo cerca de la lámina observando externamente (no a través del
ocular) con el tornillo macrométrico. Ahora mientras Ud. mira a través del ocular
enfoque despacio utilizando el tornillo micrométrico, hasta que la imagen sea visible.
Accione el tornillo micrométrico hasta que la imagen aparezca nítida.
 Si es necesario gradúe la intensidad de la luz con ayuda del diafragma y acercando o
retirando el condensador. Evite la sobre-iluminación ó sub-iluminación.
 Si después de seguir minuciosamente cada uno de los pasos descritos la imagen
deseada en el microscopio no aparece repita los pasos o acuda a su profesor.

Los siguientes ejercicios le ayudarán a familiarizarse con el uso del microscopio.

EJERCICIOS

EJERCICIO PARA EL AUMENTO DEL TAMAÑO DE LAS IMÁGENES Y

PODER DE RESOLUCION

 Coloque sobre una lámina portaobjetos con un gotero, una gota de agua, a
continuación coloque una palabra impresa y enfoque cada una de sus letras previa
colocación sobre la preparación de un cubre-objeto.
 En primer lugar observe la posición de la imagen, mueva la platina de su microscopio
hacia la izquierda y la derecha (o viceversa) y/o hacia delante y hacia atrás. En segundo
lugar observe en que sentido se mueve la imagen en cada uno de los movimientos de
la cremallera.
 Observe una letra cualquiera a simple vista y luego al microscopio con los objetivos de
5x y 40x; esquematice lo observado en cada caso.

VISUALIZACIÓN DEL PODER DE DEFINICION Y PROFUNDIDAD

 Siguiendo el anterior procedimiento monte ahora un filamento de hilo. Enfoque con

los objetivos de 5x y 40x e identifique la existencia de diferentes planos de
profundidad, manipulando exclusivamente el tornillo micrométrico hacia delante y
hacia atrás. Describa y esquematice lo observado.

VISUALIZACION DEL MOVIMIENTO CELULAR

 Monte una gota de agua estancada y observe con los objetivos 10x y 40x. Esquematice
lo observado.

NOTA: Para obtener un mayor éxito en esta parte de la práctica es necesario llevar a cabo
las siguientes preparaciones:

 Con una semana de anticipación recoja agua en dos frascos. En uno adicione hojas de
lechuga, acelgas y espinacas. Al otro frasco adicione estiércol seco de res.
Manténgalos destapados en un lugar fresco y sombreado.
 Tomar con un gotero una muestra de agua del fondo del frasco y colocar una gota
sobre la lámina portaobjetos. Adicione una gota de verde de metilo, coloque una
lámina cubreobjetos. El exceso de sobrenadante se seca con papel toalla.
 Realice otro montaje, adicione una gota de agua y una gota de rojo neutro. Cubra y
seque los bordes de la lámina con papel toalla. Observe con 5x ó 10x, si hay
microorganismos, identifíquelos, de lo contrario realice otro montaje.

EJERCICIO PARA EL USO DEL ESTEREOSCOPIO

 Tome un insecto y una hoja, obsérvelos en los diferentes aumentos, manipulando

el ángulo de incidencia de la luz. Identifique los detalles de sus estructuras. Elabore
un diagrama de un segmento del animal y de la hoja en el mayor aumento.
NOTA: Al finalizar los ejercicios complete el formato que aparece después de la
bibliografía.

CUESTIONARIO DE CONSULTA

 Explique brevemente en que consisten las aberraciones cromáticas y de esfericidad de

las lentes de ciertos microscopios. Utilice esquemas explicativos.
 ¿Es posible observar preparaciones en vivo con el microscopio electrónico? Explique
su respuesta.
 Indique algunas diferencias entre un microscopio compuesto y un estereoscopio.

BIBLIOGRAFIA

ALONSO, R., ACOSTA, M., 1987, Introducción a la física, Tomo II, Ediciones Culturales
Colombianas Ltda., Bogotá D.C.

CURTIS, H., l985, Biología, Editorial Médica Panamericana, México D.F.

DYSON, R., 1975, Principios de Biología Celular, Fondo Educativo Interamericano S.A.,
Madrid.

FALCO, P., VEGA, E., 1971, Manual del Laboratorio de Biología General, Publicaciones
U.I.S., Bucaramanga.

FONTALBA, R., 1978, Prácticas de Biología, Fondo Educativo Interamericano, Barcelona.

MATEAU, J., 1985, Atlas de Microscopía, Ediciones Jover, Barcelona.

MUÑOZ, D., 1978, Prácticas de Biología General, Primera edición, Publicaciones

Universidad Nacional de Colombia, Bogotá D.C.
VALENCIA, H., 1982, Manual de Laboratorio de Biología General, Publicaciones
Universidad Nacional de Colombia, Bogotá D.C.
 MICROSCOPIA I

 Realice una tabla en la cual aparezca el aumento total que se obtiene con cada uno de
los objetivos.

OCULAR OBJETIVO AUMENTO TOTAL

EN EL EJERCICIO PARA EL TAMAÑO DE IMÁGENES Y PODER DE RESOLUCIÓN

1. Cuando Ud. Coloca su muestra en posición de lectura, al observar a través del

microscopio, encuentra que la posición de la imagen esta:
___________________________________________________________________

2. En qué sentido se mueve la imagen cuando se hacen los siguientes movimientos:

a. Hacia la izquierda _____________________________________
b. Hacia la derecha _______________________________________
c. Hacia delante___________________________________________
d. Hacia atrás ____________________________________________

EN EL EJERCICIO DE DEFINICIÓN Y PROFUNDIDAD

 Luego de un adecuado enfoque, estudie la posible existencia de diferentes planos.
Describa y esquematice lo observado.

5x 40x
EN EL EJERCICIO DE VISUALIZACIÓN DEL MOVIMIENTO CELULAR
Esquematice en 40x.

Verde de metilo Rojo neutro

 Con base en el diagrama del microscopio asigne el nombre de la parte mecánica u

óptica del microscopio que corresponde a cada número:

1 1

11
2
3
4
7
8 5
9
10 6
12
1.___________________________ 2. ___________________________
3.___________________________4. ___________________________
5.___________________________6. ___________________________
7.___________________________8. ___________________________
8.___________________________9. ___________________________
9.__________________________10. __________________________
11._________________________12. ___________________________
 UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS ORIENTALES
FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS E INGENIERIA
LABORATORIO DE BIOLOGÍA

PRACTICA No. 2
MICROSCOPIA II

GLORIA VICTORIA CASTRO ROJAS*

MARTHA LUCIA ORTIZ MORENO*
ELIZABETH AYA BAQUERO*
HERNANDO RAMIREZ GIL*

OBJETIVOS

 Comprender y comprobar los conceptos de Poder de resolución, Poder de aumento y

campo visual del microscopio.
 Relacionar el poder de aumento y diámetro del campo visual, utilizando las unidades
de medidas micrométricas, tales como micras, Angstrom, nanómetro.
 Establecer el diámetro del campo visual para cada uno de los diferentes aumentos en
el microscopio.
 Desarrollar destrezas en la preparación de montajes húmedos y realizar mediciones de
las células presentes, con base en la determinación del diámetro del campo visual.

INTRODUCCIÓN

CAMPO VISUAL DEL MICROSCOPIO

El campo visual es aquella área circular visible al observador cuando este enfoca al
microscopio. Esta área como se verá más adelante varía de acuerdo con la clase del
objetivo y ocular utilizados en cada caso.

METODOLOGIA
MATERIALES Y EQUIPOS

Microscopio compuesto
Láminas portaobjeto
Lámina cubreobjeto
Cebolla cabezona
Papel milimetrado
Cuchillas nuevas
Agujas de disección
Goteros
Papel periódico impreso.
EL MATERIAL BIOLOGICO DEBE SER TRAIDO POR LOS ESTUDIANTES

PROCEDIMIENTO

DETERMINACION DEL DIAMETRO DEL CAMPO VISUAL

 Realice el montaje de un pedacito de papel milimetrado, enfoque con el objetivo de

menor aumento y mueva el portaobjeto, de tal manera que una línea del papel se
convierta en un diámetro del campo visual como lo muestra la figura.
A
En esta el diámetro (d) es la línea AD, así:
1mm AB + CD= AD.
B
C Pero AB = 1mm y CD = X;
(d)
de donde AD = 1mm + X.

 Se debe calcular X a simple vista para determinar el valor aproximado del diámetro.
 Es importante tener presente el valor encontrado, ya que este varía de microscopio a
microscopio y es de importancia para posteriores ejercicios y mediciones
microscópicas.

Otra manera de realizar esta medición es enfocando con objetivos de menor aumento de
tal manera que un cuadro quede completamente incluido en el cuadro visual como lo
muestra la figura.

D
A Así la determinación del diámetro
del campo visual es relativamente sencilla.
En esta figura: AB=BC=CD=DA = 1mm
Trazando la línea geométrica que equivale al
diámetro de esta figura, se calcula el valor
B C numérico aproximado empleando la fórmula
apropiada.

 El valor encontrado se compara con el obtenido con la metodología anterior. Si se

encuentra alguna diferencia entre los dos valores; ¿A que fuente de error podría
atribuirse esta?

MEDICION INDIRECTA DEL TAMAÑO DE ORGANISMOS MICROSCÓPICOS

 De la cebolla cabezona desprenda suavemente un catafilo y de él la película
epidérmica brillante, realice el montaje coloreando ligeramente con lugol.
 En 40x determine el número de células que ocupan el diámetro del campo visual,
establezca la longitud promedio de una célula. Repita el procedimiento utilizando una
hoja de Elodea.
 Calcule de nuevo la longitud de la célula en 100x.
 Esquematice cada una de las estructuras observadas.

RELACION ENTRE EL PODER DE AUMENTO Y EL TAMAÑO DEL

DIAMETRO DEL CAMPO VISUAL

 Una vez calculado el diámetro (línea de papel milimetrado) con el objetivo de 40x,
enfoque con el objetivo de 100x y analice con detenimiento si el nuevo diámetro es
menor, igual o mayor que el anterior.

 De acuerdo con sus observaciones establezca si la relación propuesta es directa, o sea,

a mayor aumento mayor diámetro del campo visual o inversa.

 Generalizando en términos de la siguiente fórmula matemática que relaciona el poder

de aumento (a1: aumento menor y a2: aumento mayor) con el tamaño del diámetro
del campo visual (d1: diámetro en menor aumento y d2: diámetro en mayor aumento.),
Establezca cuál de las dos fórmulas es correcta.

a1 = d2 a1 = d1
a2 d1 a2 d2

NOTA: Al finalizar los ejercicios complete el formato que se encuentra después de la

bibliografía.

BIBLIOGRAFIA

AVERS, C., 1991, Biología celular, Segunda edición, Grupo editorial Iberoamericana S.A.,
México D. F.

CURTIS, H., 1985, Biología, Editorial Médica Panamericana, México D.F.

DYSON, R., 1975, Principios de biología celular, Fondo Educativo Interamericano, S.A.,
Madrid.

MATEAU, J., 1985, Atlas de microscopía, Ediciones Jover, Barcelona.

MUÑOZ, D., 1978, Practicas de Biología General. Publicaciones Universidad Nacional de
Colombia, Bogotá.
 MICROSCOPIA II

 Complete la siguiente tabla para cada uno de los objetivos,

OCULAR OBJETIVO AUMENTO PODER DE PODER DE AREA O

TOTAL AUMENTO RESOLUCIÓ CAMPO
N VISUAL
2
(mm )
5X
10X
40X
100X

 ¿La imagen que Ud. obtiene en un microscopio compuesto es invertida? Explique su

respuesta.
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________

 Cuando Ud. observó la letra, ¿se ve esta uniformemente impregnada de tinta en las
tres situaciones? Justifique su respuesta con base en el concepto del poder de
resolución.
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_______________________________________________________________

 Dibuje las células en 40 y 100x para los montajes de cebolla y Elodea.

40x 100x 40x 100x

CEBOLLA ELODEA