UNIVERSIDAD AUTNOMA DE PREPARACIN DE SOLUCIONES
CHIRIQU AMORTIGUADORAS
FACULTAD DE CIENCIAS Resumen
NATURALES Y EXACTAS Se conoce como punto isoelctrico al pH
ESCUELA DE QUMICA en el cual la carga elctrica media de una
molcula es cero, y en la experiencia
realizada uno de los objetivos fue
determinar el punto isoelctrico en
aminocidos y protenas a travs de
curvas de titulacin cido-base y por
INFORME DE LABORATORIO
precipitacin respectivamente. Tambin
PUNTO ISOELCTRICO DE se obtuvieron los valores de pKa y se
AMINOCIDOS Y PROTENAS estudi la solubilidad que presentaban las
muestras de aminocidos en medio
acuoso y en soluciones amortiguadoras.
Entre los aminocidos estudiados
estuvieron la glicina (Gly) y el cido
glutmico (Glu) y la protena que se
estudio fue la casena presente en la
PRESENTADO POR
leche de vaca. En la determinacin del
SHARON CUBAS punto isoelctrico (PI) de la glicina y del
cido glutmico se obtuvo para el primer
(4-782-2072) caso valores de pKa de 2.35 y 9.76, por lo
que el PI fue de 6.05 con un margen de
error del 0.1% respecto al valor terico y
ESTEBAN ARJONA en el segundo caso (Glu), se obtuvo
valores de pKa de 2.14, 3.72 y 9.60 por lo
(4-779-2316) que el PI fue de 2.93 con 4.87% de error
con respecto al valor terico. En cuanto a
la solubilidad presentada por los
aminocidos en estudio, en medio acuoso
result insoluble el cido glutmico y
soluble la glicina Por ltimo en la
determinacin del PI de la casena por
PROFESORA precipitacin se obtuvo que dicha protena
precipit a un pH de 4.98 con 8.28% de
Mgtra. ALBERTINA MONTENEGRO error con respecto al valor terico que es
de 4.6. Podemos inferir que mediante las
curvas de titulacin se logr ver
grficamente las medidas de pKa y se
pudo localizar el PI de las sustancias
estudiadas.
Objetivos
18 DE ABRIL DE 2017 Analizar el efecto de la solubilidad de los
aminocidos en el del punto isoelctrico.
Determinar los pKa de los aminocidos
mediante la curva de titulacin.
Determinar el punto isoelctrico de una A. Titulacin de aminocidos.
protena mediante tcnica de Se titularon potenciomtricamente 25 mL
precipitacin. de muestra de aminocido, en este caso
Introduccin fueron glicina y cido glutmico, con
Montenegro (2017), seala que el punto NaOH 0.2M, adicionando 1 mL y se
isoelctrico es definido como el pH en el registr el pH hasta llegar a un pH de 10.
Los datos obtenidos se graficaron para
cual el nmero de cargas positivas se
obtener valores de pKa y PI de cada
iguala al nmero de cargas negativas que
aminocido.
aportan los grupos ionizables de una B. Solubilidad.
molcula. En el punto la carga neta de la Se verific la solubilidad que presentaban
molcula es cero. En los aminocidos los los aminocidos en medio acuoso y
grupos ionizables corresponden a grupos posteriormente la solubilidad de
carboxilos, aminos, fenlicos y tiolicos. aminocidos en soluciones
El valor para el punto isoelctrico poder amortiguadoras
ser calculado mediante la siguiente C. Determinacin del punto
ecuacin: isoelctrico de la casena de la
2 + 3 leche por precipitacin.
= Se midieron 50 mL de la leche y se
2
El punto isoelctrico de los alfa- diluyeron en 150 mL de agua. Esta se
aminocidos monoamino-dicarboxilicos titul con HCl al 1%, adicionando 0,5mL
del cido agitando en cada adicin hasta
se encuentran a un pH intermedio entre
llegar a un pH de 4.6. Y se observ la
los valores de pKa de los grupos
precipitacin de la protena en la leche.
carboxlicos y en el caso de los alfa-
aminocidos diamino-monocarboxilicos Resultados y discusin
entre los valores de pKa de los grupos A. Titulacin de aminocidos.
amino. Los puntos isoelctricos Cuadro 1. Valoracin potenciomtrica del
proporcionan informacin til para aminocido glicina (Gly) con NaOH 0.2 M.
razonar sobre el comportamiento de los GLY
aminocidos y protenas en solucin, la Titulacin potenciomtrica
presencia de grupos ionizables en estas Volumen de NaOH
pH registrado
0.2M adicionado
molculas tienen importantes
0 mL 1.55
consecuencias sobre la solubilidad. Los 1 mL 1.59
aminocidos y las protenas son menos 2 mL 1.67
solubles en su punto isoelctrico si las 3 mL 1.76
dems condiciones permanecen iguales. 4 mL 1.88
Esto se debe a que los iones dipolares no 5 mL 2.05
presentan carga neta y cristalizan en 6 mL 2.18
forma de sales insolubles a ese pH, 7 mL 2.35
(Adams, 1979). 8 mL 2.54
9 mL 2.74
Materiales y reactivos
10 mL 3.05
Bureta de 50 mL, soporte universal,
11 mL 3.74
pinzas para soporte, potencimetro, 12 mL 8.38
vasos qumicos de 100 y 250 mL, 13 mL 8.99
hidrxido de sodio 0.2M, cido clorhdrico 14 mL 9.33
0.1M y al 2%, soluciones de cido 15 mL 9.52
glutmico, glicina, prolina, lisina al 0.5% 16 mL 9.76
en HCl 0.1M, leche de vaca. 17 mL 9.92
Procedimiento 18 mL 10.22
Valores de pKa Experimental Terico
Experimental Terico 2.14 2.10
2.35 2.35 3.72 4.07
9.76 9.78 9.60 9.47
Punto isoelctrico Punto isoelctrico
Experimental terico Experimental Terico
6.05 6.06 2.93 3.08
Grafica 2. Titulacin potenciomtrica del cido
glutmico con NaOH 0.2 M. Representacin
Grafica 1. Titulacin potenciomtrica de la de los valores de pKa (en morado) y el punto
glicina con NaOH 0.2 M. Representacin de isoelctrico (en amarillo).
los valores de pKa (en morado) y el punto
isoelctrico (en amarillo). Los aminocidos son molculas
orgnicas que poseen un grupo amino, un
Cuadro 2. Valoracin potenciomtrica del grupo cido, por tanto tambin el grupo
cido glutmico (Glu) con NaOH 0.2 M. carboxlico. Su estructura general es
GLU como se muestra en la figura 1.
Titulacin potenciomtrica
Volumen de NaOH
pH registrado
0.2M adicionado
0 mL 1.35
1 mL 1.39
2 mL 1.45
3 mL 1.52
4 mL 1.60
5 mL 1.70
6 mL 1.82 Figura 1. Estructura general de un
7 mL 1.92 aminocido. Tomado de Quimitube.com
8 mL 2.14
De acuerdo con Gonzlez (2014), debido
9 mL 2.38
10 mL 2.69 a su estructura los aminocidos presentan
11 mL 3.19 un comportamiento anftero, es decir, se
12 mL 3.72 comportan como cido y como base.
13 mL 4.20 Tambin afirma que en solucin acuosa y
14 mL 4.66 a pH fisiolgico, un aminocido se
15 mL 7.45 encuentra como molcula ionizada que se
16 mL 9.12 conoce como zwitterion. En esta el grupo
17 mL 9.60
amino gana un protn adquiriendo una
18 mL 10.06
carga positiva, mientras que el grupo
Valores de pKa
carboxilo pierde el protn y adquiere una
carga negativa. En estas circunstancias, de equivalencia debido que este queda el
Gonzlez (2014) explica que la molcula disociado por la base fuerte. Como
sigue siendo globalmente neutra aunque observamos en la grfica 1 solo es
presenta grupos cargados individuales. observable dos pKa, y corresponde a los
Pues esto se debe a que cada aminocido dos grupos ionizables en la molcula de
presenta unos valores de pKa que lo glicina.
identifican; es frecuente tener los pK de
Gonzlez (2014) extiende que cuando se
los grupos ionizables de los aminocidos
realiza la valoracin de un aminocido
en una tabla para poder predecir su
neutro como la glicina, nicamente se
comportamiento cido-base.
tiene dos grupos ionizables, el grupo
Para determinar los valores de pKa de un amino, -NH2, y el grupo carboxlico, -
aminocido de forma experimental COOH, debido a que su estructura es:
frecuentemente se recurre a realizar
valoraciones cido-base, midiendo el pH
de la solucin que se est valorando. En
la primera parte del laboratorio consisti
precisamente de una titulacin
potenciomtrica cido-base de los
aminocidos glicina y cido glutmico y
con los valores obtenidos de las Figura 2. Estructura de la glicina. Tomado de
titulaciones como se muestra en el cuadro Quimitube.com
1 para la glicina y en el cuadro 2 para el
cido glutmico, se construyeron sus Como su cadena lateral solo es un tomo
correspondientes grficas (grafica 1 y 2). de hidrgeno, no hay ms grupos
Para determinar a travs de estas los ionizables que estos. Por tanto con la
valores de los pKa y el punto isoelctrico valoracin cido-base se pueden
correspondiente a cada aminocido. determinar solo los pKa de los grupos
amino y carboxlico. Por lo que en la
En el caso de un aminocido un grfica 1 se observan dos zonas tampn.
aminocido podemos determinar dos
valores de pKa, porque hay ms de un En cuanto a la valoracin del cido
grupo ionizable. El pKa para el grupo glutmico ocurre algo similar que en el
amino y carboxlico se determina por la caso de la glicina solo que en este caso
adicin de la base fuerte (NaOH). En la se debe tener en consideracin que el
prctica lo que se hizo fue preparar una cido glutmico presenta tres grupos
disolucin de aminocido de ionizables. Debido a que en su estructura
concentracin conocida. Y se valor con se presenta los grupos el grupo -
NaOH para determinar el pKa de cada carboxilo, el grupo carboxilo de la cadena
grupo presente en cada uno de los lateral y el grupo -amino (figura 3).
aminocidos en la grfica 1 vemos que el
pKa correspondiente al grupo carboxlico
presente en la glicina queda en la parte
izquierda del punto de equivalencia por lo
que inferimos que este es desprotonado
por la base fuerte formndose el ion
carboxilato, mientras que el pKa del grupo Figura 3. Estructura del cido glutmico.
amino queda del lado derecho del punto Tomado de Wikipedia.com
En el cuadro 1 y 2 se muestra tambin los
Por lo que en la grfica 2 se observan tres valores obtenidos del punto isoelctrico.
zonas tampones correspondientes a los En el caso de la glicina este valor fue de
tres valores de pKa del cido glutmico. 6.05 y en el caso del cido glutmico el
punto isoelctrico fue de 2.93. Estos
Por otro lado mediante la realizacin de
valores fueron comparados con los
estas valoraciones se puede hacer una
valores tericos y se obtuvo un 0.1% de
representacin grfica de la variacin del
error en el caso de la glicina y un 4.87%
pH de una solucin por la adicin de
en el caso del cido glutmico. Sin
equivalentes de cido o de base es a lo
embargo, estos resultados son
que se denomina curva de titulacin,
aceptables, y el error obtenido puede
sustenta Nez (2012). Por medio de
deberse a que el equipo estaba
estas curvas se puede obtener
descalibrado o a errores personales
informacin sobre:
introducidos, a pesar de esto es una
-Medida del pK de los grupos ionizables: buena prctica para determinar los pKa y
se localizan en el punto medio de la zona el PI de los aminocidos
tampn. experimentalmente en el laboratorio.
-Regiones de capacidad tampn: mesetas B. Solubilidad.
donde se localizan los pKa; dichas Cuadro 3. Datos obtenidos de la solubilidad de
aminocidos en medio acuoso.
regiones se encuentran en el intervalo pK
Aminocido pH Solubilidad
1 unidad de pH. Glicina 7.0 (+)
-Punto Isoelctrico: se localiza en el cido
7.0 ()
glutmico
intervalo de viraje. Nota: (+) soluble, () insoluble, ()
-Formas ionizables del aminocido en parcialmente soluble.
cada rango de pH.
-Carga elctrica del aminocido en cada
rango del pH
-Solubilidad relativa del aminocido en
cada rango de pH
Por lo que tambin se nos permiti
determinar el valor del punto isoelctrico A B
de cada uno de los aminocidos en Figura 4. Solubilidad de aminocidos en
estudio. Segn Nez (2012), el punto medio acuoso. A) Glicina, soluble. B) cido
isoelctrico de un aminocido se localiza glutmico, insoluble.
en el intervalo de viraje, es decir, el punto
de equivalencia; mientras que Maas En esta ocasin solo se observ la
solubilidad que presentaba cada
(2009), explica que es el pH en el que la
aminocido en medio acuoso, como se
molcula se disocia por igual en ambos
ilustra en la figura 4A, la glicina result ser
sentidos, y como equidista de los dos soluble en agua mientras que el cido
valores de pK, puede obtenerse por su glutmico fue insoluble ilustrado en la
semisuma: figura 4B. Esto se debe a que en el caso
de glicina esta presenta en su estructura
(figura 2) grupos R que en medio acuoso
darn como resultado una molcula
neutra que fcilmente interacta con el 2.5 5.35
agua. Mientras que en el caso del cido 3.0 4.98
glutmico en su estructura presenta 3.5 4.50
grupos R que en medio acuoso se
encontrarn completamente ionizado y
cargado negativamente por la presencia
del segundo grupo carboxlico.
Mora (2013) indica que los aminocidos
son compuestos slidos, incoloros,
cristalizables, de elevado punto de fusin
(habitualmente por encima de los 200 C),
algunos son solubles en agua, con
actividad ptica y con un comportamiento
Grafica 3. Titulacin de la casena en la leche
anftero. Explica que los aminocidos con
con HCl al 1%.
cadenas laterales polares son hidrfilos y
tienden a estar en la superficie de las
protenas al interactuar con el agua,
posibilitan que las protenas sean solubles
en soluciones acuosas y puedan formar
interacciones no covalentes con otras
molculas solubles en agua. Por el
contrario, los aminocidos con cadenas
laterales no polares son hidrfobos;
rechazan el agua y a menudo se agrupan
para formar el ncleo insoluble en agua de A B
muchas protenas.
Por su parte Surez (2012), extiende que Figura 3. A) determinacin de PI de la casena
los aminocidos naturales o estndar se de la leche por precipitacin. B) Casena
precipitada a pH 4.98.
pueden clasificar en funcin de su
solubilidad como: Cuadro 5. Comparacin de los resultados de
Hidroflicos: aminocidos polares y con la determinacin del pl de la leche por
tendencia a asociarse con el agua. precipitacin, con respecto al valor terico.
Hidrofbicos: aminocidos apolares con pH inicial 7.00
tendencia a repeler el agua. pl experimental 4.98
La solubilidad de los aminocidos se mide pl terico 4.6
calculando la variacin de Energa Libre
en contacto con agua a pH = 7. En el cuadro 5, observamos que el pl
obtenido experimentalmente fue de 4.98
C. Determinacin del punto sin embargo, el punto Isoelctrico(o pH
isoelctrico de la casena de la isoelctrico) de la casena es 4.6. A este
leche por precipitacin.
Cuadro 4. Datos obtenidos de la titulacin de
pH, la casena se encuentra en su punto
la casena de la leche. de menos solubilidad, debido a que hay
Titulacin potenciomtrica menos repulsiones intermoleculares, por
Volumen del HCl al lo que precipita; existe un margen de error
pH registrado
1% aadido de -8.3% debido a una mala observacin
0mL 7.00 del punto isoelctrico. Stryer (2003).
0.5 6.74 La casena representa el 80% de las
1.0 6.12
protenas presentes en la leche y el 2,7%
1.5 5.74
2.0 5.54
en composicin de la leche lquida, hay
varios tipos de casena, estas protenas
precipitan del lquido cuando esta toma un desprotonados (COO-) y los grupos amino
pH cido. El pH en el que precipitan las estaran en su forma neutra (NH2). De lo
protenas se denomina punto isoelctrico anterior se deduce que las protenas
(pI), se encuentran en el equilibrio las tienen un pH caracterstico al cual su
cargas positivas y negativas presentando carga neta es cero. A este pH se le
una carga neta de 0 y la protena denomina punto isoelctrico (pI). Snchez
presenta su mxima posibilidad para (1998).
ser precipitada ya que las partculas
se agregan. Marks (2006). Conclusiones
Debido a la composicin en aminocidos Mediante la titulacin de la glicina
de la protena, los radicales libres pueden (aminocido) con NaOH se determinaron
existir en tres formas dependiendo del los pKa de la misma, al estar diluida en
HCl y encontrarse como un cido diprtico
pH del medio: catinicos, neutros y
se observa en el grafico 1 el pKa1, pKa2
aninicos, y as cada protena tendr
y pI experimental.
un pI diferente. La propiedad Determinamos que cuando el punto
caracterstica de la casena es su isoelctrico es semejante al pH del medio
baja solubilidad a pH 4,6. El pH de las cargas positivas se iguala al nmero
la leche es 6,6 aproximadamente, de cargas negativas que aportan los
estando a ese pH la casena grupos ionizables de la molcula, por lo
cargada negativamente y solubilizada tanto el aminocido es insoluble.
como sal clcica. Marks (2006). La solubilidad de un aminocido o
Si se aade cido a la leche, la carga cualquier soluto depende de su polaridad
negativa de la superficie de la micela se y por ende su estructura.
neutraliza (los grupos fosfato se protonan) Logramos identificar el pl de la casena
mediante una titulacin con HCl, ya que
y la protena neutra precipita:
esta se separa de la leche por
acidificacin y forma una masa blanca
En el punto isoelctrico la casena se
Figura 3. Reaccin de la casena con HCl. encuentra en su punto de menos
Tomado de Stryer (2003). solubilidad, debido a que hay menos
precipita.
La casena es una protena de la leche,
del tipo fosfoprotena, que se separa de la Bibliografa
leche por acidificacin y forma una masa -Adams, J. and Wilcox. (1979). Laboratory
blanca. Cuando coagula a travs de la Experiments in Organic Chemistry. 7 ed..
Chicago: MacMillan.
reduccin del pH es llama da casena
-Montenegro, A. (2017). Manual de
cida. Snchez (1998).
laboratorio de Bioqumica 380. Punto
Cualquier protena tendra una carga neta isoelctrico de aminocidos y protenas.
positiva si se encuentra en un medio lo -Nez, V. (2012). Curvas de titulacin de
suficientemente cido debido a que los Aminocidos [DIARIUM]. Recuperado el
grupos COOH de los aminocidos 14 de abril de 2017 de
asprtico y glutmico estaran en su forma http://diarium.usal.es/vgnunez/files/2012/
neutra pero los grupos amino de Arginina 11/4.-Curvas-de-titulaci%C3%B3n-de-
y lysina estaran protonados (-NH3+). De aminoacidos.pdf
igual forma si la protena se encuentra en -Gonzlez, D. (2014). Cmo determinar
un medio con un pH muy alto estara los valores de pKa de un aminocido?
cargada negativamente ya que en este [Quimitube]. Recuperado el 14 de abril de
caso los grupos carboxilo estaran 2017 de
http://www.quimitube.com/determinar-pk- R: El punto isoelctrico se define como el
aminoacido-valoracion-acido-base pH en el cual el nmero de cargas
-Maas, J. (2009). Aminocidos y positivas se iguala al nmero de cargas
protenas. Recuperado el 14 de abril de negativas que aportan los grupos
2017 de ionizables de una molcula. En el punto
http://www.ehu.eus/biomoleculas/buffers/ isoelctrico la carga neta de la molcula
buffer3.htm
es cero (0). En los aminoci-dos los
-Mora, F. (2013). Propiedades cidas
grupos ionizables corresponden a grupos
bsicas de los aminocidos. Recuperado
el 14 de abril de 2017 de carboxilos, amino, fenlicos y tiolicos.
http://www.academia.edu/8769596/labora 3. En la precipitacin de la casena que
torio_etanol_chcl3_muestras_glicina_sol pasara si se aade muy rpido el
uble_soluble_soluble_no_soluble_no_sol cido y se alcanza un pH ms bajo
uble_alanina_soluble_soluble_soluble_n que 4.8. Qu se debe hacer en este
o_soluble_no_soluble_tript%c3%b3fano_ caso?
soluble_soluble_soluble_no_soluble_no_ R: si se adicionara muy rpido el cido la
soluble_asparagina_soluble_soluble_sol precipitacin ocurrira ms rpido y
uble_no_soluble_no_soluble afectara e la determinacin del punto
-Surez, N. (2012). Solubilidad de isoelctrico de la casena ya que se
aminocidos naturales [Saberes obtendra un pH ms cido y no se podra
prcticos]. Recuperado el 14 de abril de apreciar el momento en que la casena se
2017 de vuelve insoluble, es decir, el momento en
https://www.saberespractico.com/estudio que precipita.
s/universidad/bioquimica- 4. Por qu es necesario lavar la
universidad/solubilidad-de-los-20- casena precipitada con alcohol
aminoacidos-naturales/ (etanol 95%) y ter?
-Marks, R.; Collen S.; Lieberman, M. R: Se utiliza para la modificacin del pH,
(2006), BIOQUIMICA BASICA. Un ya sea por adicin de cidos o por
enfoque clnico. Mcgraw-hills. fermentacin lctica, provoca la
Interamericana. Espaa. desaparicin de las micelas y neutraliza
-Stryer, L. (2003). Bioqumica. Mxico: su carga elctrica teniendo como
Ed. Revert. consecuencia que las micelas se
-Snchez, A. (1998). Alteraciones de la aglomeren entre s y precipiten.
digestin de protenas y de la absorcin y
metabolismo de los aminocidos.
Bioqumica Clnica, 1 Ed. Editorial.
Madrid Espaa, McGraw-Hill
Interamericana.
Cuestionario
1. Por qu no se alcanza el pH 1 con
HCl 0.1M en las soluciones que se
prepararon los aminocidos?
R: A pH cido la Gly se encuentra como
un cido diprtico, ya que tanto el grupo
amino como el carboxilo se encuentran
protonados, es decir, a pH = 1, el 100%
de las molculas de aminocidos se
encuentran en forma de catin.
2. Por qu las molculas con grupos
ionizables se hacen menos solubles
en el punto isoelctrico?
