Captulo 4:
Cultivo por Lotes, Continuo y
Alimentado
M.Sc. Cristhian Carrasco
2012
1
3.1 Introduccin.
Dentro de los aspectos bsicos de biorreactores
es necesario tener conocimiento de lo siguiente:
La Cintica de Reaccin.
Balance de Materia.
Balance de Energa.
Propiedades de los Biocatalizadores = f(t, # fases,
# componentes)
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3.2 Aspectos Bsicos de los
Biorreactores
M.Sc. Cristhian Carrasco V. 2012
3.2.1 Balance Global de Materia.
Balance de materia
(biorreactor):
Acumulacin
aplicado
Generacin
por
Reaccin
Bioqumica
para
Flujo de
Entrada de
Materia
un
sistema
Flujo de
Salida de
Materia
Se aplica a un biorreactor:
d(Ci V)/dt = V ri + (Qe Cie - Qs Cis)
Donde:
V = Volumen del Biorreactor [L]
ri = Velocidad global de produccin de un componente i [gL-1h-1]
o Tasa Volumtrica
Qie y Qis = Caudal de circulacin [L h-1]
Cie y Cis = Concentracin de un componente i [g L-1]
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3.2.2 Balance Global de Energa.
Balance de energa aplicado para un sistema (biorreactor):
Acumulacin
de Energa
Generacin
de Energa
por
Reaccin
Bioqumica
Diferencia
de Entalpa
de Entrada
y Salida
Caudal del
Calor
(suministra
do o
retirado)
Se aplica a un biorreactor:
d(VCpT)/dt = (-H) V ri + QCp(Te - Ts) + q
Donde:
V = Volumen del Biorreactor [L]
ri = Velocidad global de produccin de un componente i [gL-1h-1]
Q = Caudal de circulacin [L h-1]
Te y Ts = Temperatura de un componente i [C]
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3.3 Reactor Discontinuo de
Tanque Agitado o Cultivo por
Lotes (Reactor Batch)
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3.3 Definicin (Cultivo por Lotes).
Los mas ampliamente aplicados a escala
industrial son los biorreactores de cultivo por
lotes siendo tanques agitados cilndricos donde
se pueden alcanzar y mantener condiciones
aspticas y donde se emplean medios muy ricos
en nutrientes.
Opera
a
bajas
densidades
celulares
(inicialmente) donde el medio de fermentacin
como el inculo se introducen en el sistema al
comienzo de la operacin.
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3.3 Biorreactor.
Esquema
v
v
Operacin:
Reactor
Discontinuo de
Tanque Agitado
(DSTR) o Cultivo
por Lotes.
Reactor
Discontinuo
Alimentado (Fedbatch) o Cultivo
Alimentado
Reactor Continuo
de Tanque Agitado
(CSTR) o Cultivo
Continuo
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3.3.1 Anlisis cuantitativo del comportamiento
del DSTR.
Balance de materia aplicado a la biomasa:
Acumulacin
Generacin
por Reaccin
Bioqumica
Se obtiene:
rx + Q (Xe X)
0
V rx = Vd(VX)/dt
t ==dX/r
x
Donde:V = Volumen del Biorreactor [L]
rx = Velocidad global de produccin de biomasa [gL-1h-1]
X = Concentracin de biomasa [g L-1]
t = tiempo necesario para un incremento de biomasa [h]
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3.3.2 Anlisis cuantitativo del comportamiento
del DSTR.
Balance de materia aplicado al sustrato y producto:
Acumulacin
Generacin
por Reaccin
Bioqumica
Se obtiene:
V rx + Q (Xe X) = 0
t = - dS/(rsx +rsp)
t = - dP/rsp
Donde:V = Volumen del Biorreactor [L]
ri = Velocidad global del componente i [gL-1h-1]
S y P = Concentracin del sustrato y producto [g L-1]
t = tiempo necesario para un incremento/consumo [h]
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3.3.3 Anlisis cuantitativo del comportamiento del
DSTR.
Considerando la definicin de la ecuacin de Monod, la
tasa volumtrica rx = X y el rendimiento de biomasa Ysx
= - dX/dS se obtiene
[Xe+Ysx(Se+Ks)]ln[(Xe+Ysx(Se-S))/Xe]- KsYsxln(S/Se) =
= m(Xe+(YsxSe))t
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3.3.4 Limitaciones del DSRT
Dependiendo de la condiciones de operacin y del M.O.
generalmente se observa:
Fenmeno de Inhibicin (por substrato o por
producto)
Limitaciones cuando se opera a altas
concentraciones de sustrato.
Fermentacin Incompleta (max. conc. de producto
y mnima de sustrato).
Mezclado Homogneo (caso ideal).
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3.4
Reactor
Alimentado
Alimentado
Discontinuo
o
Cultivo
M.Sc. Cristhian Carrasco V. 2012
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3.4 Definicin (Cultivo por Lotes Alimentado).
El
substrato/nutrientes/biocatalizadores
se
alimenta en cargas sucesivas y no se retira
producto alguno variando as el volumen del
medio de reaccin durante el proceso.
Su aplicacin permite solucionar algunos
problemas del cultivo batch teniendo en cuenta
la velocidad de adicin y/o la concentracin de
la alimentacin.
15
M.Sc. Cristhian Carrasco V. PRQ-216
15
3.4.1 Anlisis cuantitativo del comportamiento
del Fed-Batch.
Balance de materia aplicado a este proceso resulta:
Acumulacin
Generacin
por Reaccin
Bioqumica
Flujo de
Entrada de
Materia
Se obtiene:
rx + Q
(Xe X)
=0
Qe/V(C
QeCie +Vri V= d(VC
ie-Ci)+ri = dCi/dt
i)/dt
Donde:V = Volumen del Biorreactor [L]
ri = Velocidad global de produccin [gL-1h-1]
Ci = Concentracin de un componente [g L-1]
t = tiempo necesario para un incremento de biomasa [h]
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3.4.2 Anlisis cuantitativo del comportamiento
del Fed-Batch.
Balance de materia aplicado al sustrato y biomasa:
Acumulacin
Generacin
por Reaccin
Bioqumica
Flujo de
Entrada de
Materia
Se obtiene:
V = rdX/dt
x + Q (Xe X) = 0
X - (Qe/V)X
(Qe/V)(Se-S)-(X)/Ysx =dS/dt
Donde:V = Volumen del Biorreactor [L]
S y X = Concentracin del sustrato y biomasa [g L-1]
t = tiempo necesario para un incremento/consumo [h]
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3.4.3 Limitaciones del Fed-Batch
Dependiendo de la condiciones de operacin y del M.O.
generalmente se observa:
Su manipulacin es riesgosa (contaminacin)
Control riguroso de diferentes variables
(concentracin de producto, o substrato, pH, el
oxgeno disuelto, etc.).
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3.5 Reactor continuo de
tanque agitado (CSTR)
Teora del Quimiostato
M.Sc. Cristhian Carrasco V. 2012
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3.5 Definicin (Cultivo Continuo).
En la mayora de los casos, los biorreactores de
cultivo continuo son tanques agitados cilndricos
con
un
sistema
de
homogeneizacin,
generalmente mecnico, garantizando la misma
composicin en cualquier punto (evitando los
puntos
muertos
o
zonas
muertas)
denominndose como quimiostatos.
Siendo necesario detallar la clasificacin de los
sistemas de cultivo continuo:
20
M.Sc. Cristhian Carrasco V. PRQ-216
20
3.5 Clasificacin.
3.5.1 Sistemas abiertos continuos (homogneos)
Una sola etapa
Simple (Quimiostato,
Turbidiostato)
Simple con parcial
alimentacin del cultivo
Cultivo Dializado (Ddializador)
21
M.Sc. Cristhian Carrasco V. PRQ-216
21
Multi-etapas
I.
II.
1. Simple-conectados con una
alimentacin en la primera etapa
III.
II. Simple- conectados con una retroalimentacin parcial del cultivo
IV.
III. Complejo-conectados con una
alimentacin en mas etapas
IV. Complejo-conectado con una
alimentacin en mas etapas (mismo
intercambio de cultivo)
22
M.Sc. Cristhian Carrasco V. PRQ-216
22
3.5 Clasificacin.
3.5.2 Sistemas abiertos continuos (heterogneos)
a.)
b.)
a.) Simple Tubular (fluidos o sustratos slidos); b.) Tubular con parcial
alimentacin del cultivo
c.)
d.)
c.) Tubular continuamente inoculado desde el quimiostato; d.)
Counter-current system (inculo del quimiostato o con alimentacin parcial del cultivo)
23
M.Sc. Cristhian Carrasco V. PRQ-216
23
3.5 Clasificacin.
3.5.3 Sistemas cerrados continuos
a.)
b.)
a.) Vaso con paredes permeables; b.) Microorganismos crecen en la superficie
(arriba o dentro); c.) Retro-alimentacin con un separador; d.) Microorganismos
crecen en una interface (gas-liq o sol-liq).
c.)
d.)
24
M.Sc. Cristhian Carrasco V. PRQ-216
24
3.6 Teora del Quimiostato.
Es un biorreactor de tanque agitado en el
que se asume bsicamente:
El volumen de medio es constante
El caudal de salida es igual al de
entrada.
La concentracin de salida es igual a
la concentracin en el interior del
reactor.
Reduccin de los costos de capital y
operacin.
Mejor control del Proceso.
25
M.Sc. Cristhian Carrasco V. PRQ-216
25
26
M.Sc. Cristhian Carrasco V. PRQ-216
26
3.6.1 Anlisis cuantitativo del comportamiento
del Quimiostato.
Balance de materia aplicado a la biomasa:
Acumulacin
Generacin
por Reaccin
Bioqumica
Flujo de
Entrada/Salida
de Materia
Se obtiene:
V rx + Q (Xe X) = 0
E.E.
Donde:V = Volumen del Biorreactor [L]
rx = Velocidad global de produccin de biomasa [gL-1h-1]
Q = Caudal de circulacin [L h-1]
Xe y X = Concentracin de biomasa [g L-1]
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3.6.2 Anlisis cuantitativo del comportamiento del
Quimiostato.
Considerando la definicin de la velocidad de crecimiento,
la velocidad especfica de crecimiento () y la tasa de
dilucin como D = Q/V y tiempo medio de residencia =
1/D, se obtiene:
D Xe = (D -) X
dado que Xe = 0 (esterilizacin)
=D
Anlogamente para un producto (P) y un sustrato (S) se
tiene.
rp = D P = Yxp X
-rs = - [rx/Ysx+rp/Ysp] = D (S Se)
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3.6.3 Modelo de Monod para el Quimiostato.
Obedeciendo la cintica de Monod en E.E.:
Biomasa (X):
D Xe + {[(max S)/(KS + S)]- D} X = 0
Sustrato (S):
D (Se S)+ {[(max S X)/Yxs (KS + S)]} (X rp/Ysp)= 0
Producto (P):
D (Pe P)+ {Yxp {[(max S)/(KS + S)]} X = 0
M.Sc. Cristhian Carrasco V. PRQ-216
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3.6.3 Modelo de Monod para el Quimiostato
En este modelo se tiene:
Variables = X, S y P
Variables manipulables = D, , Se, Pe, Xe (donde
Pe, Xe = 0)
Parmetros cinticos y estequiomtricos = m,
Ks, Ysx, Ysp, etc.
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3.6.3 Modelo de Monod para el Quimiostato.
En condiciones estriles se tiene:
Sustrato (S):
Ks D
S =
max D
Biomasa (X):
Ks D
X = Ysx So
D
max
Producto (P):
Yxp X
P = Pe +
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31
S =
Ks D
max D
Ks D
X = Ysx So
D
max
Dependencia de X, S y DX frente a D para un RCTA (Quimiostato)
empleando la ecuacin de Monod con m = 1 h-1, Ks = 0.2 g L-1, Ysx = 0.5 y
Se = 10 g L-1
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32
Constantes de saturacin (KS) para diferentes
sustratos y M.O.
Organismo
Gnero
Sustrato
Escherichia
Escherichia
Escherichia
Candida
Candida
Candida
Saccharomyces
Aspergillus
Klebsiella
Klebsiella
Glucosa
Glucosa
Manitol
Glicerol
Oxgeno
Oxgeno
Glucosa
Glucosa
Iones magnesio
Iones potasio
KS
mg/L
6.8 x 10- 2
4
2
4.5
4.5 x 10- 1
4.2 x 10- 2
25
5
5.6 x 10- 1
3.9 x 10- 1
10- 5 M
3.8 x 10- 2
2.2
1.1
4.9
1.4
1.3 x 10- 1
14
2.8
2.3
1.0
33
M.Sc. Cristhian Carrasco V. PRQ-216
33
34
34
Constantes de saturacin (KS) para Bacterias
35
35
36
36
Tasas especfica de crecimiento (m)
37
37
3.6.3 Modelo de Monod para el Quimiostato.
Obedeciendo la cintica de Monod en rgimen no
estacionario:
Biomasa (X):
D Xe + {[(max S)/(KS + S)]- D} X = dX/dt
Sustrato (S):
D (Se S)+ {[(max S X)/Yxs (KS + S)]} (X rp/Ysp)= dS/dt
Producto (P):
D (Pe P)+ {Yxp {[(max S)/(KS + S)]} X = dP/dt
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38
3.6.3 Modelo de Monod para el Quimiostato.
Otras consideraciones importantes son:
Tasa de dilucin mxima o de dilucin crtica (wash-out)
La dilucin mxima puede obtenerse cuando S = So e
insertando este valor en la Ecuacin de Monod:
MX
MX
Ks
Ks + So
teniendo tambin la mxima productividad del producto, en el
caso de metabolitos primarios, que se obtiene en esta zona.
M.Sc. Cristhian Carrasco V. PRQ-216
39
3.6.3 Modelo de Monod para el Quimiostato.
Otras consideraciones importantes son:
Productividad
En un quimiostato la produccin de biomasa por unidad de
volumen por unidad de tiempo de cultivo se denomina
productividad, P:
P=DX
Lo importante es encontrar el valor mximo de este
producto, por lo tanto:
dP
=0
dD
x MX = Y sx So + Ks
Ks (Ks + So
))
M.Sc. Cristhian Carrasco V. PRQ-216
40
3.6.4 Limitaciones de la teora del Quimiostato
Suposiciones mencionadas:
Y = constante
= (ecuacin de Monod), Independencia
qumica del sustrato.
En casos reales las desviaciones son tan pequeas que se
pueden considerar a estas suposiciones como si se
cumplieran.
M.Sc. Cristhian Carrasco V. PRQ-216
41
3.6.5 Modelo de Monod para varias etapas.
(m
2
D1 D2 K s
D1 D2 K s
D2 ) S +
D2 K s S e S 2 +
=0
D
1
m
1
m
2
2
Quimiostato dos etapas (en serie)
M.Sc. Cristhian Carrasco V. PRQ-216
42
3.6.5 Modelo de Monod para varias etapas.
(m
2
D
D
K
D
D
K
1
2
s
1
2
s
D2 ) S 22 +
D2 K s S e S 2 +
=0
D
D
1
m
1
m
X 2 = Ysx ( S e S 2 )
dX i
= ki X i
dt
Mtodo grafico para el calculo del numero de etapas necesarias para
llevar a cabo un CSTR en serie.
Quimiostato dos etapas (en serie)
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43
"emulsification bioreactor"
Cultivo continuo de dos etapas para la degradacin de petrleo crudo en
agua de mar (Bertrand et al., 1983).
M.Sc. Cristhian Carrasco V. PRQ-216
44
3.7.6 Modelo de Monod para otros reactores.
Biostato
M.Sc. Cristhian Carrasco V. PRQ-216
45
3.7.7 Modelo de Monod para otros reactores.
Turbidiostato-cultivo continuo para bacteria
fotosintticas
M.Sc. Cristhian Carrasco V. PRQ-216
46
3.7.8 Modelo de Monod para otros reactores.
Biorreactor de tanque Agitado Continuo
M.Sc. Cristhian Carrasco V. PRQ-216
47
3.8 Ejemplo
A partir de cultivos en discontinuo de un M.O., se han
obtenido los parmetros de Monod que describe su
crecimiento (MAX = 0.2 h-1 y Ks = 0.35 gL-1). Se desea
llevar el mismo proceso en un biorreactor continuo de
tanque agitado a escala industrial.
a.) Si la alimentacin es estril, cul ser el volumen de
fermentador necesario para tratar un caudal de 500
Lh-1 de una corriente de sustrato de 30 gL-1 si se
desea alcanzar una conversin del 90%?Cul ser la
velocidad de dilucin que permite maximizar la
productividad celular? Si se sabe que el rendimiento
de substrato en biomasa es 0.09 g/g, cul ser la
productividad de biomasa?
M.Sc. Cristhian Carrasco V. PRQ-216
48
3.8 Ejemplo
a.) Dado que la conversin es del 90% (S = 3 gL-1), y
conociendo los parmetros cinticos, se puede calcular,
fcilmente la velocidad de crecimiento (ec. Monod) en las
condiciones de operacin.
MAX S
3
= 0.2
= 0.179[h 1 ]
=
Ks + S
0.35 + 3
Como en condiciones E.E., la tasa de dilucin coincide
con la velocidad especfica ().
Q
500
V=
=
= 2793[ L]
D 0.179
M.Sc. Cristhian Carrasco V. PRQ-216
49
3.8 Ejemplo
La tasa de dilucin que permite
productividad para este sistema es:
DMX
maximizar
la
0.5
Ks
0.35
1
= 0.21
= MX 1
= 0.178 [h ]
Ks + So
0.35 + 3
Comparando este valor con el obtenido se deduce que el
proceso se estaba llevando a cabo en condiciones
prximas a la zona de inestabilidad.
M.Sc. Cristhian Carrasco V. PRQ-216
50
3.8 Ejemplo
La productividad de biomasa en esa condiciones sera:
D X = D Ysx (Se S ) = 0.179 0.09 (30 3)
D X = 0.435 [ gL1h1 ]
M.Sc. Cristhian Carrasco V. PRQ-216
51
3.8 Ejemplo
b.) Se propone modificar el equipo incorporando un
separador de biomasa en la corriente de salida. Se
obtiene as una corriente de recirculacin con una
concentracin celular cuatro veces mayor que la de salida
del biorreactor. Si se desea obtener la misma conversin
global de substrato y se aplica una relacin de
recirculacin (caudal de recirculacin/caudal de
alimentacin) de 0.30. Qu caudal ser factible en estas
condiciones?
M.Sc. Cristhian Carrasco V. PRQ-216
52
3.8 Ejemplo
Puesto que se desea mantener la conversin, la
concentracin de substrato en el reactor tambin ser la
misma que en el inciso a.); y por tanto la velocidad o tasa
de crecimiento () ser, igualmente 0.179 h-1.
Aplicando un balance de materia en el reactor,
considerando que la alimentacin es estril y que opera
en E.E.
Q, X, S, P
Qo, Xo, So, Po
Qs, Xs, Ss, Ps
Qe, Xe, Se, Pe
Q, X
S, P
Qw, Xw, Sw, Pw
Qr, Xr, Sr, Pr
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53
3.8 Ejemplo
Biomasa (X):
(QeXe + QrXr) (Qe+ Qr)X + XV = VdX/dt
Por lo general, QeXe QrXr, por lo que sustituyendo
Qr = RQe, en donde R es la denominada razn de
circulacin, y, si el equipo en E.E.
RQeXr Qe(1+R)X + XV = 0
Si se divide esta ecuacin por V donde D = Qe/V
RDX r
D=
X =
D + DR
Xr
1 R
1
X
M.Sc. Cristhian Carrasco V. PRQ-216
54
3.8 Ejemplo
Reemplazando se obtiene:
0.179
1
D=
= 1.79 h
4
1 0.30 1
1
[ ]
Y por lo tanto el caudal de alimentacin Qe, ser:
[ ]
[ ]
Q = D V = 1.79 h1 2793 [L] = 5000 Lh1
M.Sc. Cristhian Carrasco V. PRQ-216
55
