PRACTICA NO 4.
TECNICAS CINETICAS Y
DE PUNTO FINAL
Adriana Moreno Valladares MSc
OBJETIVOS
Conocer los principios básicos de
diversos métodos para la medición de
sustancias. Técnica cinética y de punto
final
Identificar los posibles problemas o
errores que pueden presentarse en las
diferentes etapas del proceso analítico
PRELABORATORIO
Diferencia entre suero y plasma.
Lecturas de complejos coloreados
en tecnicas de punto final
Lectura de NAD y NADH :
cofactores en técnica cinéticas .
Que biomoleculas se pueden
cuantificar por técnicas Cinéticas y
de punto final.
FASES DEL PROCESO ANALÍTICO
Examen de laboratorio: pasos que llevan a
la obtención de un informe analítico.
Las fases que se requieren para obtención
de una prueba analítica son
Pre-instrumental
Instrumental
Post-instrumental.
SUERO CONTROL
Son mezclas de sueros de origen bovino,
porcino, equino o humano en los que se han
determinado las concentraciones de varios
constituyentes.
El propósito de este suero es determinar el
grado de Precisión y Exactitud con la que se está
trabajando en el laboratorio.
Se debe medir a diario y al cabo de los primeros
30 días se procede a realizar el CONTROL DE
CALIDAD INTERNO.
ESTANDAR O PATRON
Son sustancias de concentración y pureza
Se usan como referencia para determinar la concentración en la muestra que queremos analizar.
El fundamento del Patrón es que se utiliza para calibrar la técnica.
Para calibrar una técnica es necesario conseguir o tener el valor de una constante llamada
FACTOR que nos permitirá conocer la concentración del metabolito a analizar en nuestra, y este
FACTOR se halla con dos datos del patrón o estándar: su absorbancia y su concentración (esta
última es conocida). La fórmula para hallar este dato es:
Concentración del Patrón
FACTOR = ____________________
Absorbancia del Patrón
Si por alguna razón no podemos hallar el factor o no podemos introducirlo en el equipo,
podemos hallar la concentración del metabolito en la muestra con la siguiente fórmula:
Abs. de la muestra
CONCENTRACION DE LA = ____________________ X Concentración del
MUESTRA Patrón
Abs. del Patrón
BLANCO DE REACTIVO
El analizar un blanco de reactivo con cada serie de
problema tiene tanta importancia como introducir en la
misma un patrón.
La determinación del blanco tiene dos objetivos:
1. - Corregir las medidas de problemas y controles.
2. - Vigilar la posible contaminación de los reactivos.
Es preciso leer la absorbancia frente a agua : si es > de
0.400 esta contaminado
CLASES DE TECNICAS UTILIZADAS
EN QUIMICA CLINICA
PRUEBAS DE PUNTO FINAL
Ej. glucosa, ác.úrico, colesterol, triglicéridos, proteínas,
etc.
Rango de medición se localiza en el rango visible,
especialmente entre 500 y 600 nm, se puede leer en
varias longitudes de onda.
Los elementos importantes de una técnica de Punto
Final, son el Reactivo, el Patrón, el Tiempo de
Incubación y la Longitud de onda a que es leído.
Su fundamento es la búsqueda de la formación de un
complejo coloreado en un intervalo de tiempo.
PRUEBAS CINETICAS O ENZIMATICAS
Más sensibles y requieren un manejo más cuidadoso, sujetas a
la Temperatura. T Ambiente, 25, 30 C, indicando el factor
por el cual se deben multiplicar las absorbancias. Lectura de
deltas
Continuas: En éstas, la reacción es medida en tiempos muy
próximos, y se grafica. La gráfica resultante puede ser
ascendente o descendente, dependiendo si el cofactor gana
NADH o pierde hidrógenos NAD. Mas de dos puntos de
medida
Discontinuas: Aquí se llevan a cabo dos mediciones de la
actividad de la enzima. Una medición se hace al principio y la
otra al final de la reacción, y se cuantifica con base en la
actividad del cofactor. La técnica es llamada también Técnica
de dos puntos.
Técnicas de punto final Técnicas cinéticas
Miden reacciones enzimáticos por Miden reacciones enzimáticos a
coloración ENZIMATICAS partir de la actividad de un
COLORIMETRICAS cofactor. CINETICAS UV.
Utiliza λ de 400 a 600nm Utiliza λ de 334, 340 y 365nm
Se leen cromógenos Se lee oxido-reducción
Hay una única lectura Hay medición continua
Se lee contra blancos No hay blanco. Se lee contra
celdas de aire o agua
Presentan color Son incoloros
Se preincuba fuera del equipo Se preincuba dentro del equipo o a
la temperatura de medición
La temperatura es de 37°C o La temperatura es de 37° pero se
temperatura ambiente pueden hacer a 25°, 30° y se
corrige el valor al multiplicar por
un valor dado por el inserto
PROCEDIMIENTO
La práctica permitirá al estudiante determinar los posibles
errores que se pueden cometer en el proceso de realización de
una técnica cinética y otra de punto final. El procedimiento consta
de tres partes:
1. La primera : identificación de posibles errores en la fase pre
instrumental o preanalitica.
2. La segunda parte corresponde a la fase instrumental o analítica.
Separar muestras. Analizar los posibles errores que se pueden
generar en la fase analítica o instrumental.
3. La tercera Errores fase post analítica con situación problemica.
_El anillo.pps
Que tengan una excelente semana !!!!
